Entlacken

Das erneute Blotten von Membranen mit einem anderen Antikörper ist im Labor eine sehr häufige Aufgabe. Es gibt verschiedene Protokolle zum Strippen von Membranen, wobei die klassische Methode die Verwendung von SDS, β-Mercaptoethanol und Erhitzen vorsieht. Früher habe ich es auch so gemacht, aber das ist eine übelriechende Angelegenheit, da β-Mercaptoethanol nach faulen Eiern riecht. Dann fingen plötzlich alle im Labor an, die Re-Blot Plus  von Millipore zu verwenden – und ich auch. Bis ich beim Durchlesen des Sicherheitsdatenblatts  feststellte, dass sie billige Chemikalien zu einem überhöhten Preis verkaufen. Jetzt stelle ich den Stripping-Puffer selbst her. Meine 10-fache Lösung hat folgende Zusammensetzung:

• 2 % Natriumazid
• 1 M Tris/HCl, pH 6,8
• 1,5 M NaOH

Ich verwende die verdünnte (1x) Lösung 20–30 Minuten lang bei Raumtemperatur, wasche die Membran dreimal für je 5 Minuten in TBS-T mit 0,2 % Tween und blockiere sie zweimal für je 30 Minuten mit 5 % BSA in TBST oder PBST mit 0,1 % Tween.Das Natriumazid entfernt die Antikörper jedoch nicht, sondern inaktiviert die Meerrettichperoxidase (HRP) irreversibel. Wenn Sie daher die Stripping-Effizienz überprüfen, sehen Sie möglicherweise kein Signal mit Ihrer Chemilumineszenzlösung, dennoch könnten noch gebundene Antikörper vorhanden sein.