Bioaktives VEGF-C aus E. coli ohne In-vitro-Faltung!

Fri, 28 Oct 2022 00:00:00 +0000

Unser Artikel „Bioaktives VEGF-C aus E. coli“ wurde in Scientific Reports veröffentlicht. Hier lesen: https://doi.org/10.1038/s41598-022-22960-0.As Tatsächlich habe ich bereits 1999 die ersten Experimente zur Expression von VEGF-C in E. coli durchgeführt, jedoch nie aktives Protein erhalten. In den folgenden mehr als 15 Jahren verwendeten wir ausschließlich eukaryotische Zellen (Hefe, S2/Sf9/Hi5-Insektenzellen, CHO) zur Herstellung von VEGF-C. Vor einigen Jahren haben wir das Projekt „VEGF-C in E. coli“ wieder aufgenommen und unser Ziel schließlich im letzten Jahr erreicht. Allerdings war der Aufwand viel größer, als wir ursprünglich erwartet hatten. Zu Beginn schlugen alle Versuche fehl, und um das Projekt zu retten, entwickelten wir ein In-vitro-Faltungsprotokoll. Es war vielleicht eher Glück als Können, dass wir zufällig auf eine Kombination aus Solubilitäts-Tag und einem redoxmodifizierten E. coli-Stamm stießen, mit der es gelang, direkt bioaktives VEGF-C zu produzieren, ohne dass ein In-vitro-Faltungsschritt erforderlich war. Wir haben uns entschlossen, auch unsere erfolglosen Versuche (CyDisCo und periplasmatische Expression) in den Abschnitt „Ergebnisse“ aufzunehmen, um den „File-Drawer-Effekt“ zu vermeiden.

Proteinexpression on Michael’s Domain

Bioaktives VEGF-C aus E. coli ohne In-vitro-Faltung!