Puhdistus

Kalvojen uudelleentutkiminen eri vasta-aineella on laboratoriossa hyvin yleinen tehtävä. Kalvojen puhdistamiseen on olemassa erilaisia menetelmiä, ja klassinen menetelmä on se, jossa käytetään SDS:ää, β-merkaptoetanolia ja kuumentamista. Tein sitä ennen itsekin tällä tavalla, mutta se on hajuhaitallista, koska β-merkaptoetanoli haisee mädiltä munilta. Sitten yhtäkkiä kaikki laboratoriossa alkoivat käyttää Milliporen Re-Blot Plus  -liuosta, ja niin tein minäkin. Kunnes huomasin tarkistamalla turvallisuustiedotteen  huomasin, että he myyvät halpoja kemikaaleja kalliilla hinnalla. Nyt valmistan puhdistuspuskurin itse. 10-kertaisen liuokseni koostumus on seuraava:

• 2 % natriumatsidia
• 1 M Tris/HCl, pH 6,8
• 1,5 M NaOH

Käytän laimennettua (1x) liuosta 20–30 minuuttia huoneenlämmössä, pesen membraanin 3 kertaa 5 minuuttia TBS-T:ssä (0,2 % Tween) ja blokkaan 2 kertaa 30 minuuttia 5 % BSA:lla TBST:ssä tai PBST:ssä (0,1 % Tween).Natriumatsidi ei kuitenkaan poista, vaan inaktivoi peruunaperoksidaasin (HRP) peruuttamattomasti. Siksi, kun tarkistat puhdistustehokkuutta, et ehkä näe signaalia kemoluminesenssiliuoksellasi, mutta silti sitoutuneita vasta-aineita saattaa silti olla jäljellä.