Proteiinien tuotanto ammattilaisia paremmin

Onnittelut, Laura ja Akseli! Artikkelinne Scientific Reports -lehdessä ( https://doi.org/10.1038/s41598-024-77104-3  ) on vankka tutkimus, jolla on merkitystä paitsi sydän- ja verisuonitautien kannalta myös työmme kannalta, jota teemme lipedeemaan/lipoedeemaan (ja siten mahdollisesti jopa lymfedeemaan, joka on ollut tutkimuksemme pääkohde aiemmin). Sepelvaltimotaudin ja lipedeeman välillä on hämmästyttäviä yhtäläisyyksiä, sillä molempia voidaan pitää rasvan varastointihäiriöinä.Kiitos myös Khushbulle ja Betülille siitä, että he auttoivat Lauraa tuottamaan ja puhdistamaan niin korkealaatuista LCAT-proteiinia, joka toimi paremmin kuin kaupallisesti saatavilla olevat proteiinivalmisteet! Ehkä suuri osa salaisuudesta piili siinä, että pystyimme saavuttamaan korkeat ilmentymistasot verrattuna muihin järjestelmiin. Kokeilimme ensimmäistä kertaa HEK293T-soluja räätälöidyllä CHO-vektorilla ( pCHOKE-B-LCAT-H6  ), ja se toimi yllättävän hyvin. pCHOKE-B koottiin alusta alkaen, ja siihen sisällytettiin useita vuosien varrella kehitettyjä parannuksia verrattuna tavallisiin CHO-ilmentymisvektoreihin. Vektori sisältää

1. Yhden promootorin, joka ohjaa sekä resistenssigeenin että kohdegeenin ilmentymistä.
2. Transkriptioyksikköä reunustavat erityiset geneettiset elementit, jotka estävät proteiinin ilmentymisen alenemisen.
3. Kaksinkertaisen valintajärjestelmän, joka tarjoaa klassisen dhfr-valinnan ja geenin amplifikaation antibioottivalinnan lisäksi.
4. SV40-alkuperän, joka mahdollistaa rajoitetun replikaation 293T-soluissa ”off-label”-käyttöä varten.

Vaikka pCHOKE-B-vektori toimii hyvin verrattuna perinteisiin nisäkkäiden ilmentymisvektoreihin, olemme jatkaneet sen kehittämistä ja olemme todennäköisesti äskettäin saavuttaneet CHO-ilmentymisen ”pyhän graalin”: tasot, joita olen tähän mennessä nähnyt vain suurissa CMO-yrityksissä, kuten Lonzassa  , mutta en akateemisissa laboratorioissa. Aiomme raportoida vektorin kehityksestä erillisessä artikkelissa. Mielestäni tämä artikkeli aliarvioitiin, mutta katsotaan, mitä tiedeyhteisö ajattelee. Scientific Reports -lehden vaikutuskerroin oli 3,8 vuonna 2023  . Jos artikkeli kerää vähintään neljä viittausta seuraavien kahden vuoden aikana, se on teknisesti ottaen myyty alihintaan.