Proteine besser herstellen als die Profis

Herzlichen Glückwunsch, Laura und Akseli! Euer Artikel in Scientific Reports ( https://doi.org/10.1038/s41598-024-77104-3  ) ist eine fundierte Arbeit, die nicht nur für Herz-Kreislauf-Erkrankungen von Bedeutung ist, sondern auch für unsere Forschung zum Thema Lipödem/Lipoödem (und damit potenziell sogar für das Lymphödem, das in der Vergangenheit im Mittelpunkt unserer Forschung stand). Es gibt erstaunliche Ähnlichkeiten zwischen der koronaren Herzkrankheit und dem Lipödem, da beide als Fettstoffwechselstörungen betrachtet werden können.Und vielen Dank an Khushbu und Betül, die Laura dabei geholfen haben, ein so hochwertiges LCAT-Protein herzustellen und aufzureinigen, das besser funktionierte als die im Handel erhältlichen Proteinpräparate! Vielleicht lag ein Großteil des Erfolgs in den hohen Expressionsraten, die wir im Vergleich zu anderen Systemen erreichen konnten. Zum ersten Mal haben wir HEK293T-Zellen mit einem maßgeschneiderten CHO-Vektor ( pCHOKE-B-LCAT-H6  ) ausprobiert, und es hat überraschend gut funktioniert. pCHOKE-B wurde von Grund auf neu entwickelt, und wir haben mehrere Verbesserungen integriert, die im Laufe der Jahre im Vergleich zu herkömmlichen CHO-Expressionsvektoren erzielt wurden. Der Vektor enthält

1. Einen einzigen Promotor, der sowohl die Expression des Resistenzgens als auch des Zielgens steuert.
2. Spezielle genetische Elemente, die die Transkriptionseinheit flankieren, um eine Herunterregulierung der Proteinexpression zu verhindern.
3. Ein doppeltes Selektionssystem, das neben der Antibiotika-Selektion auch die klassische dhfr-Selektion und Genamplifikation ermöglicht.
4. Einen SV40-Origin, um eine begrenzte Replikation in 293T-Zellen für den „Off-Label“-Einsatz zu ermöglichen.

Auch wenn der pCHOKE-B-Vektor im Vergleich zu herkömmlichen Säugetier-Expressionsvektoren gut funktioniert, haben wir ihn weiter verbessert und wahrscheinlich kürzlich den „heiligen Gral“ der CHO-Expression erreicht: Expressionsniveaus, die ich bisher nur bei großen CMOs wie Lonza  , jedoch nicht in akademischen Labors. Wir planen, über die Entwicklung des Vektors in einem separaten Manuskript zu berichten. Ich denke, diese Arbeit wurde unter Wert verkauft, aber wir werden sehen, was die wissenschaftliche Gemeinschaft davon hält. Der Impact-Faktor von Scientific Reports lag im Jahr 2023 bei 3,8  . Sollte die Arbeit in den nächsten zwei Jahren vier oder mehr Zitate erhalten, wurde sie technisch gesehen unter Wert verkauft.